ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點,并具有操作簡便、無放射性危害的優點,因而多年來廣泛應用于各高校、醫院、血站和科研機構的實驗室中。
兔ELISA試劑盒實驗的結果受操作影響很大,每個步驟包括加樣,溫育,洗滌,顯色,酶標儀讀數均應認真負責才能充分發揮ELISA的高靈敏,強特異的優點。我們技術人員通過幾年的實驗觀察,認為影響ELISA實驗的因素有如下三方面。
一、、抗原、抗體活性對效價的影響:
主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活,結果不易判斷。再有ELISA試劑盒靈敏度高,對雜質的反應靈敏度也高,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;酶結合物濃度過高,也會導致OD值假性增高。試劑保存不當或活性下降;試劑盒靈敏度高。
二、、試驗儀器:
1、加樣器是否經過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,會使結果忽高忽低。
2、實驗器具被污染;酶標滴加在孔壁上,洗板未洗凈;混用洗液或洗液稀釋錯誤;洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌;讀數時酶標板底部有水蒸氣凝結;洗液瓶、廢液瓶混用;讀數過程中板孔中有氣泡;酶標儀偏差均可引起假陽性結果。
三、操作:
1、檢測前先將兔ELISA試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗結果假性降低;孵育溫度過低;
2、抗原與抗體反應達到平衡,依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,影響反應速度。
3、加入標本后未進行必要的混勻;標本稀釋錯誤;加樣量不正確;冷凍標本未*溶解混勻;標本中含有防腐劑均可引起陽性對照讀數不正常。
簡而言之,由于兔ELISA試劑盒實驗的影響因素較多,在實際工作中操作規范、仔細,避免和排除各種因素的影響,使之得到準確可靠的檢驗結果。